Caracterización de rizobios aislados de nódulos de frijol caupí, en suelos salinos de Cuba

Abstract

A partir de suelos del Valle del Río Cauto (Granma, Cuba) afectados por sales, se aislaron seis bacterias procedentes de nódulos de Vigna unguiculata (L.) Walp. Los aislados se sometieron a diferentes niveles de sales (0,17 - 6,6 dS m-1 de NaCl), pH (4,5 - 9) y temperatura (28 - 45 oC), con el objetivo de determinar su tolerancia a estos tipos de estrés. La variación en el gen 16S rRNA, se examinó a través del análisis de restricción de amplificados 16S rDNA (ARDRA) y secuenciación directa. Tres aislados, VIBA-1, VIBA-2 y VIBA-6, mostraron resultados similares al control (0,17 dS m-1) con 2,6 y 3,4 dS m-1 de NaCl. Todas las cepas crecieron a pH 7 y 9 hasta 40 oC, solo dos de ellas (VIBA-4 y VIBA-5) crecieron a 45 oC. El análisis de filogenia, confirmó la estrecha relación de la cepa Bradyrhizobium liaoningense con el aislamiento VIBA-1, y los aislamientos VIBA-2, VIBA-3, VIBA-5 y Bradyrhizobium yuanmingense, y uno de ellos a Rhizobium radiobacter (formalmente Agrobacterium tumefaciens, VIBA-4). Todos los aislados con excepción de VIBA-4, formaron nódulos en las plantas cuando fueron inoculadas. La sobrevivencia de estas cepas en condiciones de estrés (salinidad, alcalinidad y temperatura), evidencia su habilidad para crecer bajo estas condiciones ambientales específicas. Los resultados indicaron que, en un entorno de suelos salinos de Cuba, existen cepas de Bradyrhizobium que pueden establecer simbiosis con Caupí, pero la diversidad de estos microorganismos es aún escasa, debido a que sólo dos especies lograron nodular la leguminosa. In soils of Cauto River Valley (Granma, Cuba) affected by salts, six new bacteria isolated from nodules of Vigna unguiculata (L.) Walp were obtained. The six isolates were subjected to differents salt levels (0,17- 6,6 dS m-1 of NaCl), pH levels (4,5 - 9) and temperatures (28 - 45 oC) with the objective to determine their tolerance to these abiotic stresses. Variation within the 16S rRNA gene, was examined by amplified 16S rDNA restriction analysis (ARDRA) and direct sequencing to show genetic diversity. Three isolates (VIBA-1, VIBA-2 and VIBA-6) achieved similar results as the control with 2,6 and 3,4 dS m-1 of NaCl. All of the isolates could grow at pH 7 and 9 and got growth until 40 oC, only two of them (VIBA-4 and VIBA-5) grew at 45 oC. Phylogeny analysis confirmed the close relationship of one isolate with Bradyrhizobium liaoningense (VIBA-1) and four isolates with Bradyrhizobium yuanmingense (VIBA-2, VIBA-3, VIBA-5 and VIBA-6) and one to Rhizobium radiobacter (formely Agrobacterium tumefaciens, VIBA-4). All of them, with the exception of VIBA-4, were able to nodulate in the plants when they were inoculated. The survival of these strains in the different abiotic stress (salinity, alkalinity and temperature), evidenced their ability to grow under this specific environment. The findings indicated that under Cuban saline soils there are Bradyrhizobium strains able to establish symbiosis with cowpea, but the diversity is still low, being characterized only two different species able to nodulate. (sic)